目前认为,慢性阻塞性肺疾病 (COPD) 的发病机制与气道炎症有关,同时蛋白酶 - 抗蛋白酶失衡、氧化 - 抗氧化失衡亦起重要作用??寡趸瘟剖悄壳胺乐蔚闹匾械阒?。滇白珠为我国西南地区使用的草药,在湖南西部也有分布。研究证明,滇白珠含有机酸、苷类、黄酮类、木脂素、槲皮素类等多种化合物,具有活血化瘀、通络止痛、清热解毒等功效,用于治疗慢性气管炎、风湿性关节炎、风寒感冒等.本研究利用滇白珠水提物干预 COPD 大鼠后检测超氧化物歧化酶(SOD) 活力和丙二醛 ( MDA) 浓度的变化,探讨滇白珠水提物对 COPD 氧化应激的影响。

1 材料与方法

1. 1 实验动物 选取雄性 SD 大鼠 36 只 ( 湖南省长沙市开福区东创实验动物科技服务部购买,编号 HNACSDC20120292),鼠龄 12 周; 平均体质量 (278. 0 ± 26. 0) g.将大鼠随机分为对照组、模型组和用药组,各 12 只。

1. 2 COPD 模型制备 采用气管内两次注入脂多糖 ( LPS) 和反复烟熏的方法制作 COPD 大鼠模型.在第 1、14 天向 3 组大鼠气管内缓慢注入 LPS 200 μg (200 μl),将其放入自制的有机玻璃烟熏箱内,在右上角开通 1 个直径 1 cm 的通气孔。

将点燃的香烟 (长沙卷烟厂生产的白沙牌香烟) 通过三通管将烟雾吸入 100 ml 的注射器中,关闭吸烟通路一端,再打开三通管的另一端将烟雾注入烟熏箱内进行大鼠被动吸烟,2 次/ d,16 支 / 次,30 min / 次,2 次间隔 4 h 以上。用药组吸烟 8 d后,于每天吸烟前利用灌胃针给大鼠灌滇白珠水提物 1. 0 g/kg,加 0. 9%氯化钠溶液至 2 ml.对照组于同一时间灌胃等量0. 9% 氯化钠溶液。3 组处理时间均为 28 d.

1. 3 滇白珠水提物提取 滇白珠采集于湖南省湘西凤凰腊尔山镇两林乡。称取滇白珠干燥全株 800 g,切碎,浸泡,水煎3 次,30 min / 次,合并水滤液,浓缩为 1 g / ml ( 生药),得到滇白珠水提物。

1. 4 支气管肺泡灌洗液 ( BALF) 收集 将大鼠麻醉后仰卧固定于操作台,切开胸部后暴露气管及双肺,结扎右主支气管,用套管针穿刺至左肺,反复 3 次缓慢注入 3 ml 无菌 0. 9%氯化钠溶液后,回吸并用纱布过滤,得到 BALF.

1. 5 SOD 活性和 MDA 浓度测定 试剂盒均购自武汉博士德生物有限公司,检测方法按试剂盒说明书进行。血浆 MDA 测定采用硫代巴比妥酸比色法,酶性抗氧化剂 SOD 活性测定采用化学比色法。

1. 6 病理标本处理 取右肺下叶,4% 中性多聚甲醛固定,石蜡包埋,苏木精 - 伊红染色 (HE),光镜下观察形态学改变。

1. 7 统计学方法 采用 SPSS 13. 0 软件包进行统计学分析,计量资料以 (x ± s) 表示,多组间比较采用方差分析,以 P <0. 05 为差异有统计学意义。

2 结果

2. 1
3 组肺组织血浆 SOD 和 MDA 比较 3 组肺组织血浆 SOD和 MDA 浓度比较,差异均有统计学意义 (P <0. 05); 其中对照组 SOD 浓度高于用药组,用药组 SOD 浓度高于模型组,差异均有统计学意义 (P < 0. 05); 模型组 MDA 浓度高于用药组,用药组 MDA 浓度高于对照组,差异均有统计学意义 (P< 0. 05,见表 1) .【表1】


2. 2
3 组 BALF 中 SOD 和 MDA 比较 3 组 BALF 中 SOD 和MDA 浓度比较,差异均有统计学意义 ( P < 0. 05); 其中对照组 SOD 浓度高于用药组,用药组 SOD 浓度高于模型组,差异均有统计学意义 (P < 0. 05); 模型组 MDA 浓度高于用药组,用药组 MDA 浓度高于对照组,差异均有统计学意义 (P <0. 05,见表 2) .【表2】


2. 3 病理改变
肉眼观察模型组大鼠可见肺颜色苍白,体积增大。HE 染色光镜下观察,可见支气管黏膜上皮脱落、纤毛倒伏,管壁大量的淋巴细胞、单核巨噬细胞浸润,肺泡扩张,有大囊泡形成。用药组大鼠炎症程度轻,肺泡壁断裂、大囊泡形成少.

3 讨论

目前,COPD 的发病机制仍未完全阐明,其发生涉及多个方面,大量研究表明氧化应激在 COPD 发生机制中起到重要作用。氧化应激是指由于氧化剂增多和/或抗氧化剂减少导致的氧化/抗氧化失衡状态。MDA 是氧化过程中最终产物之一,由不饱和脂肪酸分解而来,包含 3 个或多个双键.1997 年,我国学者用动物模拟 COPD 模型证明了血清 MDA 浓度明显升高.本研究在建模过程中应用滇白珠水提物干预后发现用药组大鼠肺组织血浆和血清 MDA 浓度较模型组明显降低,较对照组升高,表明滇白珠水提物可以减轻 COPD 气道氧化损伤,改善慢性炎症。病理学切片显示支气管和肺组织病理损伤较模型组减轻,说明滇白珠水提物在一定程度阻止 COPD 病理进程。

SOD 是机体清除超氧阴离子惟一的抗氧化酶,在一定程度上表示了机体的抗氧化能力.本研究结果表明,与对照组相比,模型组大鼠 BALF 和血浆 SOD 降低、MDA 升高,提示存在氧化应激损伤。与模型组比较,用滇白珠水提物干预后的大鼠 BALF 和血浆 MDA 降低、SOD 升高,从而提示滇白珠水提物在一定程度上能够改善 COPD 大鼠的氧化应激程度,对COPD 的治疗有一定作用。

综上所述,滇白珠水提物可以下调 COPD 的 MDA 表达,升高 SOD 活性,减轻和控制气道氧化应激反应,进而控制病情的发展,为临床治疗 COPD 提供新的方法和思路。

参考文献

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